【预期用途】
用于细胞增殖培养,不具备对细胞的选择、 诱导、分化功能,培养后的细胞用于体外诊断。(不用于微生物鉴别和药敏实验)。
【检验原理】
可以支持原代骨髓细胞短期培养,在中期阶段加入有丝分裂抑制剂,阻止有丝分裂,提供后续检测,如染色体核型分析。
【主要组成成分】
含有谷氨酰胺的RPMI-1640基础培养基、胎牛血清、抗生素
【适用范围】
骨髓体外增殖培养。
【储存条件及有效期】
培养基应贮存在-10~-20℃,有效期为2年,溶解后应存放于2-8℃,并于10天内使用。 存放及使用时注意避光。
【生产日期与失效日期】
详见产品标签。
【使用仪器】
显微镜、二氧化碳细胞培养箱、离心机。
【样本要求】
新鲜骨髓细胞
【使用方法】
1. 种骨髓:向装有10ml培养基的玻璃或塑料瓶中接种0.5ml的骨髓穿刺液,轻轻转动培养管使混合。
2. 培养:置37℃二氧化碳细胞培养箱培养72小时。
3. 终止培养:向每个培养管中加入秋水仙酰胺溶液,终浓度为0.1ug/ml,静置15-30分钟。
4. 收获细胞:将培养液转移至离心管中,离心力500g,离心5分钟。
5. 低渗处理:除去上清液,加入5-10ml 0.075M KCl溶液重新悬浮细胞,37℃孵化10-12分钟。
6. 离心:500g,离心5分钟,弃去上清液。
7. 固定:固定液为醋酸:甲醇=1:3,每个离心管中逐滴加入新鲜配制的、预冷的固定液5-10ml。置于4℃10分钟。
8. 再固定:重复步骤6和7。
9. 滴片:加入0.5-1ml固定液制成悬液。用吸管吸取细胞悬液,滴至干燥洁净的载玻片上,空气中晾干。
10.经吉姆萨染色处理后做染色体核型分析。
【参考值(参考范围)】
细胞倍增指数大于2
【检验结果的解释】
细胞培养时间、加入秋水仙酰胺的量以及低渗操作时间对结果影响较大,如发现制片所得的分裂相较少,需要对实验条件及样品进行确认。
【检验方法的局限性】
仅用于骨髓细胞培养
【产品性能指标】
1. 装量差异限度:±3%
2. 澄清度:澄清
3. PH值:7.2-7.6
4. 渗透压(mOsm/kg):280-320
5. 无菌检测:无菌
6. 内毒素(EU/ml):<10
7. 细胞生长实验:细胞倍增指数大于2
【注意事项】
1. 本品仅用于体外诊断,不用于临床治疗,严禁内服,不能用嘴吸液。
2. 试剂包装如有破损或滴漏,严禁使用。
3. 操作过程应避免污染。
4. 操作人员在检验时应做好防护,预防血液病传播。
5. 操作人员万一与皮肤、粘膜接触,请立即用自来水冲洗。
6. 溶液应为澄清,如有沉淀物,严禁使用。
7. 禁止使用超出规定有效期的产品。