PH0534 | CCK8试剂盒（Cell Counting Kit-8）

公司简介

Phygene（飞净）于2015年通过ISO9001:2008质量管理体系认证，洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统、完善的原材料及成品质检体系和优秀的研发团队，为生命科学和分子诊断公司用户提供高质量产品。

Phygene的产品线涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物医学、即用型试剂等领域的多种试剂及试剂盒，并与多个国内外高效和研究机构均保持长期的合作关系，涉及的产品被中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、浙江大学、兰州大学、南京大学等知名科研院所广泛使用，可靠而稳定的质量和完善的售后服务确立了“Phygene”良好的品牌形象。

产品描述

货号	PH0534
名称	CCK8试剂盒（Cell Counting Kit-8）
货号&规格	PH0534-100 | 100T (1ml) PH0534-500 | 500T (1ml×5) PH0534-1000 | 1000T (1ml×10)
存储	CCK溶液在避光，0-5℃的条件下可以保存6个月以上，如长期保存，可在-20℃下保存2年以上，经常使用试剂存放在0-5℃，为防止背景值增加干扰实验结果，请勿反复冻融。
产品简介	Cell Counting Kit(CCK试剂盒)细胞增殖与活性检测试剂盒是一种基于WST-8（2-（2-甲氧基-4硝基苯）-3-(4-硝基苯)-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐），WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜染料（formazan，参考图1）。WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 本试剂盒提供了一种灵敏度高，操作简便，使用安全的细胞增殖与活性检测方法。与传统的MTT实验相比优势明显： ★ MTT实验生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO等有机溶剂溶解；而本方法产生的甲臜是水溶性的，不仅省去了溶解的步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差。 ★ 与MTT方法相比，本方法线性范围更宽，灵敏度更高。 ★ 本方法对细胞无毒性，可以多次测定，选取最佳测定时间。 ★ 本方法所用试剂在培养基中比MTT更加稳定，实验效果重复性好。 ★ MTT具有毒性，同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解，会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒，使用中无需有机溶剂，操作更加安全。 ★ 使用无需配制，即开即用。 本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测，抗肿瘤药物的筛选，细胞增值的测定，细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便，试剂盒包含一管已经配制好的含有WST-8的CCK溶液，即开即用，无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜，可直接使用96孔板或者384孔板在酶标仪上检测，适合大规模，高通量的样品检测。
使用说明	使用方法（以96孔板为例，其他规格培养板按实际情况安排）： 1. 在96孔板中配置100μl的细胞悬液（通常细胞增殖实验每孔加入100μl 2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100μl 5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定）。按照实验需要，进行培养（在37℃，5%CO2，的条件下）预培养24小时。 2. 向培养板加入1-10μl不同浓度的待测药物刺激。 3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（后面附表中有具体细胞的建议时间，例如：6、12、24或48小时）。 4. 每孔加入10μl CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，会影响OD值的读数）。如果起始的培养体积为200μl，则需加入20μl CCK溶液，其他情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK溶液但没有加入细胞的孔作空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 5. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时候分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。 6. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度，如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。 7. 如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。 8. 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 数据分析：详见细胞增殖分析与细胞毒性分析具体操作流程可下载该产品说明书。
注意事项	1. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。 2. CCK检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。任何待测体系中存在还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。 3. 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。 4. 建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要查到培养基液面下加样，溶液产生气泡，会干扰OD值读数。 5. 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔（100μl培养基）。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500个/孔，（100μl培养基），且培养时间长一些。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。 6. 加入CCK溶液时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色已变化或PH值变化。建议换用新鲜的培养基。 7. 如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。 8. 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。 9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

*Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我们所提供的产品仅供科研使用，不得用于临床诊断、治疗、食品或者化妆品等用途！

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