PH0532 | Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Detection Kit）

公司简介

Phygene（飞净）于2015年通过ISO9001:2008质量管理体系认证，洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统、完善的原材料及成品质检体系和优秀的研发团队，为生命科学和分子诊断公司用户提供高质量产品。

Phygene的产品线涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物医学、即用型试剂等领域的多种试剂及试剂盒，并与多个国内外高效和研究机构均保持长期的合作关系，涉及的产品被中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、浙江大学、兰州大学、南京大学等知名科研院所广泛使用，可靠而稳定的质量和完善的售后服务确立了“Phygene”良好的品牌形象。

产品描述

货号PH0532

名称Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Detection Kit）

货号&规格

PH0532-100 | 100T

存储4℃保存，有效期一年 产品组分

注：Buffer A工作液配制用：双蒸水将10×Buffer A稀释10倍。

产品简介

荧光染料Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。而PI染料是不能进入细胞膜完整的正常细胞和凋亡细胞中，即活细胞对PI染料拒染，而坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被PI染料染色。根据这些特性，用Hoechst 33342结合PI染料对凋亡细胞进行双染色，就可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。

在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst 33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst 33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst 33342+/PI++）。

注意事项

【试剂盒以外需自备仪器和试剂】荧光显微镜或流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5mL Microtube、载玻片、盖玻片

1、在红色荧光对兰色荧光散点图上，还可见到细胞凋亡区向细胞坏死区迁移的轨迹，可能是凋亡细胞的DNA进一步降解的缘故。

2、用Heochst 33342染料与细胞孵育的时间不宜过长，一般控制在20min之内为宜。如果太长可引起Heochst 33342的发射光谱由蓝光向红光的迁移，导致红色荧光与兰色荧光的比例改变，从而影响结果的判断。

3、Propidium Iodide （PI）有毒，操作时要戴手套。

使用说明

1、悬浮生长的细胞离心收集，固定培养的细胞消化收集后，将10⁵~10⁶个细胞悬浮于1mL培养基中，再加入10μL Heochst 33342 染液，混匀，370℃孵育5～15 min；

2、细胞于40C ，500～1000r/min离心5min弃去上清液；

3、加入1.0mLBuffer A工作液(用双蒸水将10×Buffer A稀释10倍)悬浮细胞，加入5μL PI染液，室温避光放置5～15min后混匀；

4、荧光显微镜观察：Heochst 33342用氪激光激发的紫外光，激发波长为352nm，发射波长为400～500nm，产生兰色荧光；PI用氩离子激光激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光。

5、流式细胞仪分析：Heochst 33342用氪激光激发的紫外光，激发波长为352nm，发射波长为400～500nm，产生兰色荧光；PI用氩离子激光激发荧光，激发光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光。分析兰色荧光对红色荧光的散点图或地形图。结果判断：在兰色荧光对红色荧光的散点图上，结果为：正常细胞为低蓝光/低红光，凋亡细胞为高蓝光/低红光，坏死细胞为低蓝光/高红光。

*Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我们所提供的产品仅供科研使用，不得用于临床诊断、治疗、食品或者化妆品等用途！

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