PH0531 | Annexin V-EGFP/PI 凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit）

公司简介

Phygene（飞净）于2015年通过ISO9001:2008质量管理体系认证，洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统、完善的原材料及成品质检体系和优秀的研发团队，为生命科学和分子诊断公司用户提供高质量产品。

Phygene的产品线涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物医学、即用型试剂等领域的多种试剂及试剂盒，并与多个国内外高效和研究机构均保持长期的合作关系，涉及的产品被中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、浙江大学、兰州大学、南京大学等知名科研院所广泛使用，可靠而稳定的质量和完善的售后服务确立了“Phygene”良好的品牌形象。

产品描述

货号PH0531

名称Annexin V-EGFP/PI 凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit）

货号&规格

PH0531-50 | 50T

存储2-8 ℃避光保存 产品组分

>>4×Binding Buffer-----10ml

>>Propidium Iodide, PI-----500ul

>>Annexin V-EGFP-----250ul

产品简介

Annexin V-EGFP/PI 凋亡检测试剂盒是一种采用Annexin V-EGFP 与PI 双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。

细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS 暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使 PS  暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性，对 PS 有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）不能通过完整的活细胞，但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色，因此通常将Annexin V 与PI 配合染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。

使用说明

1. 细胞样品的准备：

a. 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g 左右离心3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50 μl 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1 ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1 ml4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

b.  对于悬浮细胞：1000×g 左右离心3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50 微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1 ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5 毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50 μl 左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

2. 用去离子水按 1:4 稀释Binding Buffer（4 ml Binding Buffer+12 ml 去离子水）；

3. 用 250  μl Binding Buffer 重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml；

4. 取100 μl 的细胞悬液于 5 ml 流式管中，加入 5 μl Annexin V-EGFP 和10μl  20μg/ml 的PI 溶液；

5. 混匀后于室温避光孵育15 分钟；

6. 在反应管中加 400μl  PBS，流式细胞仪（FACS）分析。

注意事项1. 消化细胞时不能用含 EDTA 的胰酶。2. 本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。3. 需自备 PBS 和去离子水。4. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。5. PI 对人体有刺激性，请注意适当防护。6. 请穿实验服并戴一次性手套操作。

实验参考图片*Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

我们所提供的产品仅供科研使用，不得用于临床诊断、治疗、食品或者化妆品等用途！

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