PH0530 | 细胞周期与凋亡检测试剂盒（Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit）

公司简介

Phygene（飞净）于2015年通过ISO9001:2008质量管理体系认证，洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统、完善的原材料及成品质检体系和优秀的研发团队，为生命科学和分子诊断公司用户提供高质量产品。

Phygene的产品线涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物医学、即用型试剂等领域的多种试剂及试剂盒，并与多个国内外高效和研究机构均保持长期的合作关系，涉及的产品被中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、浙江大学、兰州大学、南京大学等知名科研院所广泛使用，可靠而稳定的质量和完善的售后服务确立了“Phygene”良好的品牌形象。

产品描述

货号PH0530 名称细胞周期与凋亡检测试剂盒（Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit）货号&规格

PH0530-50 | 50T

存储-20℃避光保存产品组分

>>Dyeing Buffer | 22.5ml

>>25×Propidium Iodide, PI | 750ul

产品简介

细胞周期与凋亡检测试剂盒是一种采用经典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的检测试剂盒。

碘化丙啶(Propidium，简称PI)是一种双链DNA 的荧光染料。碘化丙啶和双链DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA 的含量成正比。细胞内的DNA 被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA 含量测定，然后根据DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假设G0/G1 期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA 的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA 复制的S 期细胞的荧光强度为1-2 之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA 片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA 片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1 峰，即凋亡细胞峰。细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向和侧向光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察细胞凋亡情况。

本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

本试剂盒每个样品的细胞数量可以为10-100 万。

使用说明

1. 细胞样品的准备：

a. 对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g 左右离心3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1 毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

b. 对于悬浮细胞：1000×g 左右离心3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50 微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1 ml 冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5 毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl 左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

2. 细胞固定：

取4 毫升冰浴预冷的95%乙醇，低速涡旋震荡的同时加入1 毫升细胞悬液，混匀后4℃固定2 小时或更长时间。固定12-24 小时可能效果更佳。1000×g 左右离心3-5 分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl 左右的乙醇，以避免吸走细胞。加入约5ml 冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl 左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3. PI 染色液的配制：

参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的PI 染色液：

	1 个样品	6 个样品	12 个样品
DyeingBuffer	4.8 ml	0.4 ml	2.4 ml
25×Propidium Iodide，PI	15 μl	90 μl	180 μl
RNase A(10mg/ml，自备)	1 μl	6 μl	12 μl
注：配制好的PI 染色液短时间内可以4℃保存，宜当日使用。

4. 染色：

每管细胞样品中加入400μl PI 染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30 分钟。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24 小时内完成流式检测，最好能在当日完成流式检测。

5. 流式检测和分析：

用流式细胞仪在激发波长488nm 波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA 含量分析和光散射分析。

注意事项1. 本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。2. 需自备 PBS、95%乙醇和RNase A。3. 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。4. PI 对人体有刺激性，请注意适当防护。5. 请穿实验服并戴一次性手套操作。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。