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Cell Signaling(CST)  9800  p44/42 MAP Kinase Assay Kit (Nonradioactive)

产品编号  9800 |  Cell Signaling(CST)

Cell Signaling Technology公司的细胞分析试剂盒提供了从头至尾的试剂和可行的操作步骤，从而在最少的时间内得到最精确的结果。这些充分验证的全套试剂盒可用于评估细胞生存、增殖、生存能力以及酶和激酶活性。

产品描述

Description

Nonradioactive p44/42 MAP Kinase Assay Kit provides all the reagents necessary for measuring p44/42 MAP kinase activity in the cell. Immobilized Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) mAb is used to immunoprecipitate active p44/42 MAP kinase from cell extracts, then an in vitro kinase assay is performed using Elk-1 protein as a substrate. Elk-1 phosphorylation is then detected by Western blotting using Phospho-Elk-1 (Ser383) Antibody.

Nonradioactive p44/42 MAP Kinase Assay Kit提供了检测细胞中p44/42 MAPK激酶活性所需的所有试剂。固定的Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) mAb用于免疫沉淀细胞提取物中活化的 p44/42 MAP kinase，接着在体外激酶试验中用Elk-1作为底物。Elk-1的磷酸化由Western blotting分析确定，使用的抗体是Phospho-Elk-1 (Ser383) Antibody。

Background

丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是一个具有广泛保守性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，在许多细胞过程中起作用，比如细胞增殖、分化、运动和死亡。p44/42 MAPK (Erk1/2)信号转导通路能在应答各种胞外刺激后被激活，这些刺激因子包括有丝分裂原、生长因子和细胞因子(1-3)，并且被研究者认为是诊断和治疗癌症的重要靶点(4)。受到刺激后，三个不同层次的蛋白激酶级联反应就连续被开启，这三个层次的分子包含MAPKKK（MAP3K）、MAPKK（MAP2K）、MAPK。多种p44/42 MAP3Ks已经被鉴定出来，包括Raf家族成员，以及Mos、Tpl2/Cot。MEK1、MEK2是该通路中主要的MAPKKs(5,6)。MEK1、MEK2通过分别磷酸化p44和p42蛋白的活化环内的Thr202/Tyr204位点和Thr185位点/Tyr187位点，从而激活p44、p42。目前已经鉴定出p44/42的一些下游靶点，包括p90RSK (7) 和下游转录因子Elk-1 (8,9)。双特异性(Thr/Tyr) MAPK磷酸酶家族成员DUSPs、MKPs (10)，以及MEK抑制子如U0126、 PD98059，可以负调节p44/42。

1 Roux, P.P. and Blenis, J. (2004) Microbiol Mol Biol Rev68, 320-44.

2 Baccarini, M. (2005) FEBS Lett579, 3271-7.

3 Meloche, S. and Pouysségur, J. (2007) Oncogene26, 3227-39.

4 Roberts, P.J. and Der, C.J. (2007) Oncogene26, 3291-310.

5 Rubinfeld, H. and Seger, R. (2005) Mol Biotechnol31, 151-74.

6 Murphy, L.O. and Blenis, J. (2006) Trends Biochem Sci31, 268-75.

7 Dalby, K.N. et al. (1998) J Biol Chem273, 1496-505.

8 Marais, R. et al. (1993) Cell73, 381-93.

9 Kortenjann, M. et al. (1994) Mol Cell Biol14, 4815-24.

10 Owens, D.M. and Keyse, S.M. (2007) Oncogene26, 3203-13.

Application References

ØPhuchareon, J. et al. (2015) Proc Natl Acad Sci U S A112, E3855-63.Applications:

ØRussell, K.S. et al. (2000) Proc Natl Acad Sci U S A97, 5930-5.Applications:In vitro kinase assay

ØTan, J. et al. (2000) J Neurosci20, 7587-94.Applications:In vitro kinase assay

ØJost, M. et al. (2001) J Biol Chem276, 6320-6.Applications:In vitro kinase assay

ØSkapenko, A. et al. (2001) J Immunol166, 4283-92.Applications:In vitro kinase assay

ØGui, Y. and Zheng, X.L. (2003) J Biol Chem278, 53017-25.Applications:In vitro kinase assay

ØHsu, H.Y. et al. (2004) J Immunol173, 5989-99.Applications:In vitro kinase assay

ØWong, C.H. et al. (2005) Endocrinology146, 1192-204.Applications:In vitro kinase assay

ØHe, Z. et al. (2005) J Biol Chem280, 2446-54.Applications:In vitro kinase assay

ØSchlezinger, J.J. et al. (2006) Toxicol Sci92, 433-44.Applications:In vitro kinase assay

ØJia, W. et al. (2006) Mol Cancer Res4, 549-62.Applications:In vitro kinase assay

ØZampieri, C.A. et al. (2007) J Virol81, 1230-40.Applications:In vitro kinase assay

ØHa, U. et al. (2007) J Immunol178, 1736-47.Applications:In vitro kinase assay

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Protocols

9800 :

Western Blotting  Immunoprecipitation (Sepharose)  

Companion Products

Ø7727 Biotinylated Protein Ladder Detection Pack

Ø9101 Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) Antibody

Ø9151 Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261) Antibody

Ø9211 Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) Antibody

Ø9221 Phospho-ATF-2 (Thr71) Antibody

Ø9231 Phospho-MKK3 (Ser189)/MKK6 (Ser207) Antibody

常见问题及解答

如何选择抗体

Ø我看到很多抗体都加了一个XP®，XP® 是什么意思？

Ø有些抗体名称里有个括号，括号里面是什么意思？

Ø我怎么知道有没有我需要的蛋白？

实验疑难问题解答

ØWB封闭用牛奶好还是BSA好？二抗稀释液用什么？

Ø做磷酸化抗体的时候一定要用脱脂奶粉稀释吗？

Ø我的抗体的浓度是多少？

在组织样本中如何操作

Ø我用的是组织样本，该如何破碎？

ØCST 的抗体是否适用于全组织样本裂解物？

抗体芯片

Ø抗体芯片的保质期是多久？有多个孔，我一次用不了那么多，该如何保存？

细胞因子

Ø人细胞因子适用于老鼠吗？

Ø应该怎样配制PH3.0，20 mM的柠檬酸？

Ø在我使用蛋白时是否应该使用载体蛋白？

siRNA

ØsiRNA有两个或多个的情况，该如何选择？哪个效果好？

ELISA标准品

ØELISA 有标准品吗？我如果买了其他公司的标准品，可不可以配套使用？

定制抗体

Ø需要更进一步的帮助吗？

Ø我能够订购一个定制配方的抗体吗？

ØCST能够定制我的抗体吗？

储存运输及发表文章

ØCST如何确保抗体的质量？

Ø我该如何储存我的抗体？多高的温度会影响抗体的稳定性？

Ø我需要发表文章，需要知道你们的产地，该如何写?

公司介绍

CST公司是一家由研究型科学家创建于1999年的家族式私营企业，在全球范围内拥有超过400多名员工。CST活跃于应用系统生物学研究，尤其是与癌症相关的领域。作为一家始终致力于科学研究的公司，CST深知抗体的高特异性和批次间性能的一致性至关重要。因此我们坚持自己生产所有的抗体，并在多种应用中进行严格的验证。同时，正是生产这些抗体的CST科学家为客户提供技术支持，帮助他们设计实验，解决问题以获得最可靠的结果。我们之所以这样做，是因为如果我们做实验，我们也想要得到同样的服务。事实上，CST的确是这样的。

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