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TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒 （显色法，通用型）<br/>TUNEL Apoptosis Detection Kit
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PH0535 | TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（显色法，通用型）TUNEL Apoptosis Detection Kit
公司简介
Phygene（飞净）于2015年通过ISO9001:2008质量管理体系认证，洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统、完善的原材料及成品质检体系和优秀的研发团队，为生命科学和分子诊断公司用户提供高质量产品。
Phygene的产品线涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物医学、即用型试剂等领域的多种试剂及试剂盒，并与多个国内外高效和研究机构均保持长期的合作关系，涉及的产品被中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、浙江大学、兰州大学、南京大学等知名科研院所广泛使用，可靠而稳定的质量和完善的售后服务确立了“Phygene”良好的品牌形象。
产品描述
货号 | PH0535 |
名称 | TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒（显色法，通用型）| TUNEL Apoptosis Detection Kit |
货号&规格 | PH0535-20T--官方价：￥3200.00--折扣价：￥1920.00 PH0535-50T--官方价：￥4800.00--折扣价：￥ 2880.00 |
存储 | -20℃保存。（Streptavidin-HRP 4℃避光保存，DAB在-20℃避光保存） |
产品组分 | |
产品简介 | TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核 DNA 的断裂情况，其原理细胞在发生凋亡时，会激活一些 DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA。细胞凋亡时抽提 DNA 进行电泳检测，可以发现 180-200bp 的 DNA ladder。基因组 DNA 断裂时，暴露的 3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的 dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的 Streptavidin(Streptavidin-HRP)结合，最后在 HRP 的催化下通过 DAB 显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 的断裂，因而没有3'-OH 形成，很少能够被标记。这就是 TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。 |
产品特点 | ① 操作简便：使用Ready-to-Use 型试剂，并配有Proteinase K和DAB。② 高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。③ 高特异性：能特异性染色凋亡细胞。④ 快速操作：整体操作约需3小时。⑤ 方便观察：使用光学显微镜观察实验结果。⑥ 高正确性：有阳性对照片的制备方法，可以确认试剂盒的有效性。 |
注意事项 | ① 使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。② 因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。③ 为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。④ TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。⑤ 另因DAB为固体粉末，使用前加入适量PBS 溶解，配制成20×DAB（10 mg/ml）后，按下述方法显色使用。⑥ 用户自备：二甲苯、多聚甲醛、甲醇、乙醇、PBS、H2O2 、TritonX-100、柠檬酸钠、复染染液：苏木素或甲基绿等；盖玻片、载玻片、染色缸、染色湿盒、光学显微镜、37℃孵箱、移液器等。 |
使用说明 【样本预处理】 TUNEL检测时样本的预处理是试验的关键所在，本说明书推荐的条件仅为普遍情况，用户需根椐自已的样本材料及首次试验结果来调整各个条件，如处理时间、处理浓度等，来优化出适合自身样本的试验条件，从而做出客观的试验结果。 1、 对于细胞样本 a、 把准备好的细胞涂片或爬片自然晾干。b、 把晾干的样本浸入固定液，室温（15-25℃）固定15-60min。（固定液的配制：4%多聚甲醛溶于PH7.4的PBS中，需新鲜配制）c、 把固定好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min。d、 把c步处理好的样本浸入封闭液中，室温（15-25℃）封闭10min。（封闭液的配制： 3%H2O2溶于无水甲醇）e、 把d步处理好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min。f、 把e步处理好的样本浸入通透液中，冰上（2-8℃）促渗2min。（通透液的配制：0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，需新鲜配制）g、然后转入B步骤标记和显色反应。 【注意事项】 a、 为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。b、 固定好的样本可以在-20℃的70%乙醇中放置30分钟或过夜，以改善细胞的渗透性。c、 使用PBS漂洗细胞样本时，不要直接加在细胞样本上，以防止细胞样本的脱落。d、 固定液、PBS、封闭液、通透液、染色缸需用户自备，请按上述方法配制。 2、 对于石蜡切片 a、 按常规方法将石蜡切片进行脱蜡及水合（如：二甲苯脱蜡2次，每次5-10 min；乙醇水合（将脱蜡好的的切片依次放入100%乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇2min））b、 把a步处理好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min。c、 把b步处理好的样本加入蛋白酶K工作液， 21-37℃作用15-30min。（蛋白酶K工作液的配制：2μL 50×蛋白酶 K＋98μL PBS）d、 把c步处理好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min。e、 把d步处理好的样本浸入封闭液中，室温（15-25℃）封闭10min。（封闭液的配制： 3%H2O2溶于甲醇）f、 把e步处理好的样本浸入PBS漂洗2次，每次5min。g、 然后转入B步骤标记和显色反应。 【注意事项】 a、 蛋白酶K处理的使用浓度、处理时间及温度，都因组织的类型不同而有所不同，需要自已摸索优化上述条件，如有问题，请根椐本说明书的《常见问题的原因及推荐解决方案》来调整条件。例如：如果凋亡细胞染色较弱时，可用高浓度的Proteinase K（400μg/mL）处理5分钟。（本试剂盒的50×Proteinase K浓度为1mg/mL）。 b、 其它替代方法： 石蜡切片的预处理也可根椐实际情况可采用下述三种替代方法之一，即蛋白酶K处理的步聚改用下述方法，其余步聚均相同： 替代方法1:将脱蜡及水合好的切片浸入通透液中8-10 min（通透液的配制：0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，需新鲜配制） 替代方法2：将脱蜡及水合好的切片浸入胃蛋白酶或胰蛋白酶中8-10 min（胃蛋白酶溶液的配制：0.25%-0.5%溶于HCl PH2；胰蛋白酶溶液的配制：0.25%-0.5%溶于0.01N HCl ） 替代方法3:将脱蜡及水合好的切片浸入含200ml 0.1M的柠檬酸缓冲液PH= 6 的塑料盒中，置于微波炉中350W（低档）处理5 min。为防止样本脱落，请使用硅烷（Silane）处理的载玻片或采用多聚赖氨酸铺片。 c、 使用酶处理切片时一定要把酶洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。 3、 对于冰冻切片 a、 把冰冻切片浸入固定液，室温（15-25℃）固定30min。（固定液的配制：4%多聚甲醛溶于PH7.4的PBS中，需新鲜配制）b、 把a步处理好的样本浸入PBS漂洗2次，每次15min。c、 把b步处理好的样本浸入封闭液中，室温（15-25℃）封闭10min。（封闭液的配制： 3%H2O2溶于甲醇）d、 把c步处理好的样本浸入PBS漂洗2次，每次5min。e、 把d步处理好的样本浸入通透液中，冰上（2-8℃）促渗2min（通透液的配制：0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，需新鲜配制）f、 然后转入B步骤标记和显色反应。 4、对于难处理的切片 a、 按常规方法将石蜡切片进行脱蜡及水合（如：二甲苯脱蜡2次，每次5-10 min；乙醇水合（将脱蜡好的的切片依次放入100%乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇2min））b、 把a步处理好的样本浸入PBS漂洗2次，每次5min。c、 把b步处理好的样本加入浸入含200ml 0.1M的柠檬酸缓冲液PH= 6 的塑料盒中，置于微波炉中750W（高档）处理1 min。d、 迅速加入80ml双蒸水（20-25℃）加入c步处理好切片的塑料盒中，冷却至室温， 将组织切片转移至PBS（20-25℃）中。e、 把d步处理好的样本浸入封闭液中，室温（15-25℃）封闭10min。（封闭液的配制： 0.1M Tris-HCl PH 7.5、3%BSA、20%小牛血清）f、 把e步处理好的样本浸入PBS漂洗2次，每次10min。g、 然后转入B步骤标记和显色反应。 5、 阳性对照及阴性对照的准备 TUNEL检测同时需要设阳性和阴性对照，以显示试验的客观性及准确性。因此需要按下述方法准备两个样本来制备阳性及阴性片，其后续步聚与待测样本同样进行。 a、 阳性对照样本的准备 样本在蛋白酶K处理、PBS浸洗后，细胞样本在Triton X-100通透液处理、PBS浸洗后，再加入100μL DNase I反应液（用户自备）室温—37℃处理10 -30 min，其余步骤均相同。（DNase I反应液的配制：10u-3000u DNase I,40mM Tris-HCl PH 7.9,10 mM NaCl, 6mM MgCl2,10mM CaCl2） b、 阴性对照样本的准备 在标记反应的过程中不添加TdT酶反应液，其余步骤均相同。 A、 标记和显色反应： 1、预处理好的样本 PBS 漂洗 2 次，每次 5min 后，样本周围用滤纸或吸水纸吸干。 2、配制 TdT 酶反应液：参考下表配制适当量的 TdT 酶反应液（根据需要按照比例放大），需充分混匀。注意：配制好的 TdT 酶反应液必须一次使用完毕，不能冻存。 3、每个样本滴加 50μL TdT 酶反应液，加盖玻片 37℃避光湿润反应 60min。（阴性对照片不加 TdT 酶） 4、把第3步处理好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min。 5、Streptavidin-HRP及DAB工作液的配制：Streptavidin-HRP工作液的配制：参考下表配制适量的Streptavidin-HRP工作液，需充分混匀。注意：配制好的Streptavidin-HRP工作液必须一次使用完毕，不宜冻存。 DAB 工作液的配制： a、先把试剂盒中 DAB 粉末用 PBS 溶解配制成 20×DAB（10 mg/ml），配制方法如下： b、参考下表配制适量的 DAB 工作液，需充分混匀。注意：配制好的 DAB 工作液必须一次使用完毕，不宜冻存。 6、 将第5步处理好的样本周围用滤纸或吸水纸吸干，再滴加50μL Streptavidin-HRP工作液，加盖玻片37℃湿润避光反应30min。 7、 把第6步处理好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min，样本周围用滤纸或吸水纸吸干。 8、 将第7步处理好的样本滴加50μL-100μL DAB工作液，室温孵育5-30分钟或根据显色情况孵育适当时间。注意：如果显色很强可以短于5分钟即停止显色，如果显色很弱，可以适当延长显色时间，甚至显色过夜。 9、 把第8步处理好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min，可直接光学显微镜下观察、拍照。 10、选做(本步骤可不做)：用苏木素染色液或甲基绿染色液进行细胞核染色。随后用PBS漂洗3次，每次5min，光学显微镜下观察、拍照。 常见问题与分析 |
*Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
我们所提供的产品仅供科研使用，不得用于临床诊断、治疗、食品或者化妆品等用途！
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重庆市寰宇安泰生物科技有限公司
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品牌
Phygene
型号
PH0535
规格
20T
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